Recouvrement en HPLC

[Yayou]

Bonjour,

Je travail dans un laboratoire pharmaceutique depuis 2mois, et j'ai effectuer des analyses en HPLC pour des dosage quantitatifs. Lors de l'analyse des résultats, on m'a demander de calculer le recouvrement entre les témoins 1 et 2. Mais je ne comprend pas ce que c'est. Mon sujet de stage porte dessus, et je ne comprend pas ce que j'ai fait avec cette valeur, ni à quoi elle me sert. Quelqu'un pourrait-il m'expliquer ce que je ne comprend pas?
Merci d'avance

[darrigan]

Si deux substances donnent des pics très proches sur le chromatogramme, tellement proche qu'ils se recouvrent, alors il sera difficile de réaliser une intégration de ces pics dans le cas d'un mélange, et donc de déterminer précisément la quantité, relative ou absolue, de ces deux substances.

Car si tu as un grand pic et un épaulement, tu as bien les deux substances présentes, mais tu ne peux pas intégrer correctement : où placer la séparation entre les deux pics ?

Donc si cela arrive et que tu dois absolument quantifier ces deux substances, il vaudrait mieux trouver des conditions (température, pression, éluant, gradients...) qui séparent mieux les pics, de sorte à obtenir un recouvrement le plus faible possible, voire nul.

[Yayou]

Alors oui j'ai eu se problème la avec un autre produit, mais ce que je ne comprends pas c'est ce qu'est le recouvrement en lui-même, et à quoi il sert. Mon recouvrement doit être comprit entre 98 et 102%. Donc il n'est pas nul?!

[darrigan]

J'ai l'impression que nous parlons de la même chose ! Quelle est pour toi la définition du "recouvrement" et comment le calcules-tu ?

[Yayou]

Alors, si j'ai bien compris comment on calcule le recouvrement:
(aire du témoin 2 * masse du témoin 1) / (aire du témoin 1 * masse du témoin 2)

[darrigan]

OK alors en effet on ne parle pas de la même chose.

Moi je faisais allusion au recouvrement entre deux pics, qui indique une résolution, c'est-à-dire la qualité de la séparation entre deux pics.
$ R_S = 2\frac{t_{R2}-t_{R1}}{w_1+w_2} $
où les $ t_R $ sont les temps de rétentions et les $ w $ les largeur à mi-hauteur des pics, pour les substances 1 et 2.

Je ne connais pas le "recouvrement" telle que tu le définis (en même temps, je ne suis pas un spécialiste de chromatographie... donc je peux avoir des lacunes). Je ne peux pas t'aider plus. Quelqu'un d'autre ?